911制作白晶晶

• 纯化得到的DNA内毒素水平低于0.1 EU/µg

• 纯化流程快，同时去除内毒素

• 获得高产量、高拷贝质粒顿狈础

• 使用尝测蝉别叠濒耻别，获得的裂解和高产量的顿狈础

EndoFree Plasmid Kits基于阴离子交换技术，可快速制备不含内毒素的质粒DNA。QIAfilter Cartridges过滤快速澄清裂解液，DNA的产量500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制备的DNA 纯度超过两次CsCl梯度离心法所得DNA的纯度，适合超转染级纯的应用。

纯化的质粒DNA内毒素污染水平取决于所用的纯化方法（参见"Endotoxin levels in plasmid preparations"）。硅胶技术纯化的DNA具有非常高的内毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和两次CsCl超速离心可获得相对低水平内毒素的纯DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的内毒素去除步骤，获得<0.1 EU/µg的质粒DNA。

QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊设计的过滤装置，用于代替细菌细胞碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可wanquan去除SDS沉淀，清除细菌裂解液，相比离心可大量节约时间，减少1小时的质粒纯化时间。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用内部真空方式轻松高效的清除大量细菌裂解液（注意：该试剂盒不包含瓶子）。

QIAGEN-tips中dute的阴离子交换树脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）专为核酸纯化而开发。它的分离性能使得DNA纯度与连续两次CsCl梯度离心获得的DNA纯度相当。由重力流驱动并持续运转的预装 QIAGEN-tips，限度减少手动制备质粒所需的时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用有毒物质，如benfen，氯仿，溴化乙锭和CsCl，限 度地减少对用户和环境的危害。

内毒素，又称脂多糖或尝笔厂，是大肠杆菌等革兰氏阴性菌细胞膜的组成部分，如大肠杆菌（参见Bacterial cell wall）。 内毒素在质粒裂解纯化过程中释放出来，并显著降低内毒素敏感细胞株的转染效率。此外，内毒素与DNA竞争“自由"转染试剂，影响转染实验中质粒DNA的摄 取。内毒素也诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞发生非特异性免疫反应，从而导致转染结果的误读。这些反应包括诱导的蛋白质和脂类，如IL-1和前列腺素等的 合成。总体而言，内毒素在转染实验中是不可控变量，影响结果的可重复性，使它们难以对比、解读。在基因治疗研究中，内毒素可造成内毒素休克综合症和激活补 体级联，干扰研究。

在碱性条件下，细菌细胞裂解，使用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。将Endotoxin Removal Buffer加入到过滤后的裂解液中。冰浴后，将纯净的裂解物上样到阴离子交换柱上，在适当的低盐和pH条件下，质粒DNA选择性结合。用中盐缓冲液清除 RNA、蛋白质、代谢产物和其他低分子量杂质，超纯质粒DNA被高盐缓冲液洗脱（参见QIAGEN Plasmid Kit procedures）。最后顿狈础由异丙醇脱盐、沉淀并且离心回收。

使用EndoFree Plasmid Kits纯化的DNA适合多种敏感应用，包括：

• 转染，包括原代、敏感以及悬浮细胞

• 基因治疗研究

• 基因沉默

• 显微注射